鉴别非洲猪瘟野毒株与基因缺失疫苗株的三重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种鉴别非洲猪瘟野毒株与基因缺失疫苗株的 TaqMan 探针荧光定量 PCR 检测方法，根据非洲猪瘟病毒(ASFV)的 B646L、EP402R、MGF360- 13L 基因序列，分别设计 PCR 引物和 TaqMan 探针，绘制标准曲线，并进行重复性试验、特异性试验、敏感性试验与临床样品检测，建立三重 TaqMan 探针荧光定量PCR 检测方法。 结果显示，以 B646L、EP402R 和 MGF360- 13L 重组质粒为标准品绘制的标准曲线具有良好的线性关系，线性相关系数(R²)分别为 0.995、0.997 和 0.997；建立的方法与多种猪常见病原不存在交叉反应，特异性良好；对 B646L、MGF 360- 13L 与 EP402R 基因的检测下限均为 10 copies/ μL，变异系数均<2%，该方法灵敏度高；当临床样品稀释至 10^{- 5}时，即滴度为 10^2.5TCID₅₀/ m L 时仍能检测到病毒粒子，具有较高的临床使用价值。 本研究建立了一种高效、灵敏、特异的 ASF...