CSFV、PRRSV、PEDV和PRV四重荧光定量PCR方法的建立及应用

为了快捷地进行规模化猪场疫病风险评估，建立了一种同时检测猪场环境中猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的荧光定量PCR方法。根据CSFV 5′UTR基因、PRRSV Nsp2基因、PEDV M基因和PRV g E基因保守区，设计特异性引物和探针，通过优化PCR反应条件，建立了四重荧光定量PCR方法。结果显示，该方法可特异性扩增CSFV、PRRSV、PEDV和PRV，与TGEV、RV、PCV2、PPV、PRV Bartha-K61、JEV、E.coli、S.suis 2等病原体无交叉反应，四种病毒的最低检出值为4.62×10¹copies/μL，批内及批间变异系数为0.003～0.016。与国标方法相比，两种方法阳性符合率为83.33%～100.00%(182份组织样品)。运用该方法检测猪场采集的434份肛拭子、鼻拭子及环境样品，肛拭子和环境样品中PEDV检出率较高，分别为16.53%和11.90%；环境样品中PRV检出率较高，为8.28%。综上结果，此方法为规模化猪场进行疫病风险评估提供...