牛病毒性腹泻病毒可视化一步RT-LAMP检测方法的建立

为建立可视化一步RT-LAMP检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法，根据GenBank中的BVDV的5′UTR序列，设计2组RT-LAMP引物，经过反应温度、反应时间、Mg²⁺和甜菜碱的终浓度的优化，特异性及灵敏性试验，对3种常用显色指示剂钙黄绿素-MnCl₂、羟基萘酚蓝和中性红的显色效果进行评估，并使用商品化ELISA试剂盒与本方法进行对照试验。结果显示，经优化本方法在66℃30 min即可完成反应，采用中性红作为显色指示剂，检测BVDV可产生特异阳性反应；对BVDV RNA检测下限最低达0.021 pg/μL；对13份临床样品检测结果与商品化ELISA检测试剂盒相符率100%。结果表明，所建立的BVDV可视化一步RT-LAMP检测方法的特异性、灵敏性较好，可为BVDV临床快速检测提供帮助。