| 兔出血症病毒与欧洲野兔综合征病毒复合RT-PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 王印,杨泽晓,韩雪清,汪开毓,姚学萍,白瑜. 兔出血症病毒与欧洲野兔综合征病毒复合RT-PCR检测方法的建立[J]. 中国兽医科学, 2011, 0(11) |
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| 作者姓名： | 王印 杨泽晓 韩雪清 汪开毓 姚学萍 白瑜 |
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| 作者单位： | 四川农业大学动物医学院;动物疫病与人类健康四川省重点实验室;中国检验检疫科学研究院; |
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| 基金项目： | 教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRT0848); 四川农业大学双支计划项目(00270401); 博士后培养经费项目(04310621); 四川省教育厅青年基金项目(11ZB064) |
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| 摘 要： | 为建立用于兔出血症病毒(RHDV)和欧洲野兔综合征病毒(EBHSV)诊断鉴别的快速检测方法,根据GenBank中的RHDV和EBHSV基因组序列,设计合成5条特异性引物和9条重叠延伸引物,分别以通过重叠延伸PCR人工合成的EBHSV VP60基因中359bp基因片段构建的重组质粒pGM-T-EBHSV和RHDV RT-PCR产物构建的pGM-T-RHDV为模板,经过反应条件的优化、敏感性试验和特异性试验,初步建立了RHDV和EBHSV的复合RT-PCR检测方法,并对20份临床样品和5份RHDV人工感染样品进行了检测。结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可分别扩增出RHDV和EBHSV的特异性目的片段192bp和335bp,对2种病毒的检测限度均可达到50copies的目的基因片段,兔巴氏杆菌、兔大肠杆菌和沙门氏菌核酸扩增均为阴性。样品检测结果显示,5份人工感染样品的RHDV检出率为100%,20份临床样品的RHDV检测为阴性。
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| 关 键 词： | 兔出血症病毒 欧洲野兔综合征病毒 反转录-聚合酶链反应 重叠延伸PCR |
Development of a complex RT-PCR assay for the detection and differentiation of rabbit hemorrhagic disease virus and European brown hare syndrome virus |
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| WANG Yin,YANG Ze-xiao,,HAN Xue-qing,WANG Kai-yu,YAO Xue-ping,BAI Yu. Development of a complex RT-PCR assay for the detection and differentiation of rabbit hemorrhagic disease virus and European brown hare syndrome virus[J]. Chinese Veterinary Science, 2011, 0(11) |
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| Authors: | WANG Yin YANG Ze-xiao HAN Xue-qing WANG Kai-yu YAO Xue-ping BAI Yu |
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| Affiliation: | WANG Yin1,YANG Ze-xiao1,3,HAN Xue-qing2,WANG Kai-yu1,YAO Xue-ping1,BAI Yu1 (1.College of Veterinary Medicine,Sichuan Agricultural University,Ya'an 625014,China,2.Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing 100029,3.Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | rabbit hemorrhagic disease virus European brown hare syndrome virus RT-PCR overlap extension PCR |
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