| 鼠伤寒沙门氏菌Χ4550 FlhD基因缺失株的构建 |
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| 引用本文： | 耿士忠,潘志明,方强,胡娇,陈祥,焦新安.鼠伤寒沙门氏菌Χ4550 FlhD基因缺失株的构建[J].中国兽医科学,2010,40(1). |
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| 作者姓名： | 耿士忠 潘志明 方强 胡娇 陈祥 焦新安 |
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| 作者单位： | 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏,扬州,225009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，国家科技支撑计划项目，江苏省自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 为构建鼠伤寒沙门氏菌Χ4550FlhD基因缺失所致的鞭毛缺失株,采用PCR技术从减毒鼠伤寒沙门氏菌Χ4550基因组DNA中扩增出了鞭毛控制操纵子基因(FlhD)两侧翼基因片段,作为FlhD基因敲除所需的上臂和下臂的同源序列;以pKD4质粒为模板,扩增了卡那霉素(Km)抗性基因,并分别克隆入pMD18-T载体中,获得了重组质粒pMD-FlhD-U、pMD-FlhD-D和pMD-Km。将获得的上臂和下臂基因以及卡那霉素抗性基因通过拼接,构建重组质粒pMD-ΔFlhD/Km。将重组片段ΔFlhD/Km亚克隆入pG-MB151自杀质粒,并转化大肠杆菌χ7213,获得重组菌χ7213(pGMB151-ΔFlhD/Km)。将此细菌作为供体菌,与受体菌鼠伤寒沙门氏菌Χ4550进行固相杂交,经同源重组和抗生素筛选,获得鼠伤寒沙门氏菌Χ4550(ΔFlhD/Km)鞭毛缺失株。通过PCR扩增、动力学鉴定及电镜观察,显示鼠伤寒沙门氏菌Χ4550的FlhD基因已被成功敲除。证实,运用同源重组的方法可成功地敲除鼠伤寒沙门氏菌Χ4550的FlhD基因,并导致其鞭毛缺失,为鼠伤寒沙门氏菌鞭毛的功能研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 鼠伤寒沙门氏菌X4550 FlhD基因 同源重组 鞭毛缺失 |
Construction of flagella mutant by knocking out FlhD gene of Salmonella typhimurium X4550 |
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| GENG Shi-zhong,PAN Zhi-ming,FANG Qiang,HU Jiao,CHEN Xiang,JIAO Xin-an.Construction of flagella mutant by knocking out FlhD gene of Salmonella typhimurium X4550[J].Veterinary Science in China,2010,40(1). |
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| Authors: | GENG Shi-zhong PAN Zhi-ming FANG Qiang HU Jiao CHEN Xiang JIAO Xin-an |
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| Institution: | GENG Shi-zhong,PAN Zhi-ming,FANG Qiang,HU Jiao,CHEN Xiang,JIAO Xin-an(Key Laboratory of Zoonoses of Jiangsu Province,Yangzhou University,Yangzhou 225009,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Salmonella typhimurium X4550 FlhD gene homologous recombination flagella defi-ciency |
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