无乳链球菌透明质酸酶的可溶性表达及其对小鼠的致病作用

为了明确透明质酸酶(Hyl)在鱼源无乳链球菌致病过程中的作用,根据Gen Bank上公布的罗非鱼源无乳链球菌Hyl的全基因序列设计引物,采用PCR方法扩增长度为3 156 bp的hyl B基因片段。经限制性内切酶Eco RⅠ和XhoⅠ消化后克隆至表达载体p ET-32a(+),构建重组表达质粒p ET-32a(+)-hyl B,经双酶切、测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核表达。结果显示,137.1 ku的目的蛋白获得成功表达,平板法证实该重组蛋白具有良好的降解透明质酸的活性;用纯化的重组蛋白注射ICR小鼠,病理组织学观察显示,肺和脑组织出现明显的出血和炎性细胞浸润等病理变化。结果表明,Hyl在鱼源无乳链球菌引致肺炎和破坏血脑屏障引起脑膜炎过程中发挥重要作用。