| 摘 要： | 本研究以牛分枝杆菌valleeⅢ菌株的基因组DNA为模板,PCR扩增hbha和hsp65基因,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得融合基因hbha-hsp65,构建重组表达质粒p ET-hsp65、p ET-hbha、p ET-hsp65-hbha,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达蛋白纯化后与等体积的弗氏不完全佐剂混合,制备成浓度为150 g/m L的HBHA-HSP65亚单位疫苗。用其免疫BALB/c小鼠,评价其免疫保护效力。结果显示,表达蛋白的分子质量分别为65、28、95 ku,主要以可溶状态存在;ELISA测定的HBHA-HSP65的血清抗体效价达1∶16 000,显著高于HBHA、HSP 65和BCG组(P0.05);经MTT法测定,平均刺激指数为2.45,HBHA-HSP65组显著高于HSP65(P0.05)、HBHA和BCG免疫组(P0.01)和PBS(P0.01);HBHA-HSP65的脾、肺荷菌量检测结果显示,该亚单位疫苗可明显降低牛分枝杆菌在小鼠脾的荷菌量(P0.05),几乎完全切断对肺的感染(P0.01)。结果表明,HBHA-HSP65亚单位疫苗能够在小鼠体内激发细胞免疫和体液免疫应答,对牛分枝杆菌感染小鼠有一定的预防保护效果,具有良好的免疫原性。
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