| 产气荚膜梭菌EF-Tu基因的原核表达及其多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 解真真,郑晓星,李广兴,张艳,李兰兰. 产气荚膜梭菌EF-Tu基因的原核表达及其多克隆抗体的制备[J]. 中国兽医科学, 2013, 0(2): 111-117 |
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| 作者姓名： | 解真真 郑晓星 李广兴 张艳 李兰兰 |
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| 作者单位： | 东北农业大学动物医学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31172295,31272569);中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室开放基金项目(SKLVBF201207) |
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| 摘 要： | 通过PCR方法扩增产气荚膜梭菌ATCC13124株EF-Tu基因,利用原核表达载体pGEX-6P-1构建重组质粒pGEX-EF,经双酶切和测序鉴定正确后转化E.coli Rosseta,进行IPTG诱导表达,表达产物纯化后免疫大白兔制备多克隆抗体,应用间接ELISA、Western-blot和间接免疫荧光方法对所得抗体进行检测。结果显示,经1.0mmol/L IPTG诱导5h后蛋白表达量最高,并且主要以包涵体的形式存在,分子质量为69ku。间接ELISA方法检测的多抗血清效价为1∶262 144。Western-blot结果证实,重组蛋白与产气荚膜梭菌ATCC13124株制备的多克隆抗体发生特异性结合,具有良好的免疫原性。Western-blot和间接免疫荧光结果表明,多抗血清能分别与pGEX-EF重组蛋白、ATCC13124菌体裂解液、pcDNA3.1-EF-Tu瞬时转染后的BHK-21细胞及ATCC13124感染的小鼠肠组织中菌体发生特异性结合反应。上述结果表明,此多克隆抗体能够应用于临床诊断。
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| 关 键 词： | 产气荚膜梭菌 EF-Tu基因 多克隆抗体 Western-blot |
Prokaryotic expression of Clostridium perfringens EF-Tu gene and preparation of the polyclonal antibody |
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| XIE Zhen-zhen,ZHENG Xiao-xing,LI Guang-xing,ZHANG Yan,LI Lan-lan. Prokaryotic expression of Clostridium perfringens EF-Tu gene and preparation of the polyclonal antibody[J]. Chinese Veterinary Science, 2013, 0(2): 111-117 |
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| Authors: | XIE Zhen-zhen ZHENG Xiao-xing LI Guang-xing ZHANG Yan LI Lan-lan |
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| Affiliation: | (College of Veterinary Medicine,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China) |
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