犬N1ICD基因的克隆与真核表达

本研究利用RT-PCR扩增比格犬Notch1基因的胞内域(notch1 Intracellular domain of Notch,N1ICD),将其克隆到真核表达载体中,在293T细胞中表达,进一步鉴定其分子生物学特征。结果,首次克隆获得犬N1ICD基因,序列长度为2 469 bp,编码822个氨基酸,蛋白质分子质量为87.3 ku。序列分析结果显示,核酸序列与大鼠、马、牛、黑猩猩、绵羊、小鼠、猕猴、人的相似性分别为83.0%、87.9%、86.8%、86.4%、87.4%、83.2%、86.5%、86.3%,进化上与马的关系最近;氨基酸序列与大鼠、马、牛、黑猩猩、绵羊、小鼠、猕猴、人的相似性分别为87.8%、91.5%、89.9%、88.5%、90.9%、87.8%、89.2%、88.7%,进化上同样与马的关系最近。预测的二级结构可能存在63个α-螺旋、65个β-折叠、48个无规则卷曲。本试验成功构建了p3×FLAG-CMV10-N1ICD真核表达载体,为进一步研究犬N1ICD与犬乳腺肿瘤之间的作用奠定了基础。