基因重排减毒狂犬病病毒的拯救及遗传稳定性的研究

通过探究基因重排减毒狂犬病病毒的拯救及其遗传稳定性,为后期制备狂犬病口服弱毒活疫苗奠定基础。利用反向遗传学技术,采用脂质体转染的方法,将纯化后的全长重组质粒与4个辅助性表达质粒共转染BSR细胞;通过RT-PCR技术、间接免疫荧光试验对重组病毒进行鉴定及遗传稳定性分析。结果显示,第6~15代病毒液均可扩增出狂犬病病毒N基因、G基因、PM基因、L基因,与预期结果相符;激光共聚焦显微镜观察发现,试验组出现了大量的荧光灶点,空白对照组未见绿色荧光;间接免疫荧光鉴定结果与RT-PCR检测结果相符,证明基因重排狂犬病病毒拯救成功,且遗传稳定性良好。本试验结果表明,不仅可以将弱毒疫苗株Srv9的毒力进一步减弱,而且大大提高了其免疫原性,突破了制备新型狂犬病口服减毒疫苗的瓶颈。