基于同源重组技术的表达CRE重组酶的减毒沙门菌的构建及功能初步研究 |
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引用本文: | 高兴,刘晶,张赞,刘洋,许可,杨桂连,姜延龙,王春凤.基于同源重组技术的表达CRE重组酶的减毒沙门菌的构建及功能初步研究[J].中国兽医科学,2018(10). |
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作者姓名: | 高兴 刘晶 张赞 刘洋 许可 杨桂连 姜延龙 王春凤 |
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作者单位: | 吉林农业大学动物科学技术学院吉林省动物微生态制剂工程研究中心动物生产及产品质量安全省部共建教育部重点实验室 |
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摘 要: | 为了构建表达Cre重组酶的减毒沙门菌,本试验首先将Cre重组酶表达框插入到自杀质粒pYA3599中,构建重组自杀质粒pYA3599-Cre,电转至感受态χ7232中,经酶切鉴定与测序后,电转至χ7213感受态中,得到含有自杀质粒pYA3599-Cre的重组菌χ7213。随后通过同源重组,经两步筛选,将Cre重组酶表达框整合至减毒沙门菌χ11802的基因组中,得到重组减毒沙门菌χ11802-Cre,通过Western-boltting技术检测重组酶Cre的表达,进而将报告质粒pYA4545-lox P电转至重组菌中验证Cre重组酶的功能。结果显示,成功构建了自杀质粒pYA3599-Cre,并基于同源重组技术成功将重组酶Cre表达框整合至χ11802基因组中,通过Western-blotting成功检测出重组酶Cre的表达,且报告质粒电转至重组菌中可被切除lox P位点之间序列。本试验成功构建出能表达重组酶Cre的减毒沙门菌,为后期以位点特异性重组酶Cre为基础的减毒沙门菌微环DNA疫苗的构建奠定了基础。
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