CREB对添加食欲素A体外培养的绵羊卵巢黄体化颗粒细胞分泌孕酮的影响

为探讨食欲素A(orexin A)影响绵羊卵巢颗粒细胞分泌孕酮是否受环磷酸腺苷(cAMP)及其下游环磷酸腺苷效应原件结合蛋白(CREB)的调节,体外培养绵羊卵巢颗粒细胞并进行姬姆萨染色、卵泡刺激素受体免疫荧光染色鉴定后,采用细胞免疫组化手段对CREB的存在及位置做出确定。经黄体化处理后分组添加不同浓度(10 nmol/L、100 nmol/L、1 mol/L)的食欲素A受体阻断剂(HY-10805A)孵育2 h,再添加不同浓度(10 nmol/L、58 nmol/L)的食欲素A,运用ELISA方法检测细胞内cAMP浓度的变化。在细胞培养液里添加不同浓度(100 nmol/L、1 mol/L、10 mol/L)的CREB抑制剂(HY-101120)孵育2 h,后添加相同浓度(10 nmol/L)的食欲素A,运用ELISA方法检测细胞培养上清液中孕酮的浓度。结果显示,姬姆萨染色后,可见长梭形或不规则星形卵巢颗粒细胞,细胞着色均匀,胞浆淡蓝色,细胞核深蓝色。免疫组化试验组细胞形态清晰,胞核呈黄色,胞浆无染色。添加食欲素A受体阻断剂组与对照组相比,cAMP的浓度显著降低(P0.01),不同浓度CREB抑制剂组与对照组相比,孕酮含量均下降,且下降趋势在其浓度为10 mol/L时达到最高(P0.01)。结果表明,绵羊卵巢颗粒细胞中存在CREB,且浓储于细胞核,外加食欲素A可影响绵羊卵巢颗粒细胞cAMP的含量,而在阻断其下游原件CREB后,孕酮分泌明显受到影响,说明CREB对绵羊卵巢颗粒细胞的孕酮分泌有影响。