伪狂犬病病毒gB抗原的可溶性原核表达及纯化条件的优化

为实现伪狂犬病病毒gB蛋白的可溶性表达,基于伪狂犬病病毒gB基因的序列分析及密码子优化,基因合成gB基因胞外区(含全部抗原表位)序列,亚克隆至原核表达载体pSMK中,获得表达载体pSMKgB。经大肠杆菌诱导表达,并对诱导温度、可溶性、IPTG加入时机、终浓度及诱导时间进行优化。结果表明,伪狂犬病病毒的gB蛋白在16℃、D600值为1.2、IPTG终浓度为0.8mmol/L的条件下,诱导20h,蛋白表达效果最好。经超声破碎,镍柱纯化可获得可溶性的gB蛋白。蛋白印迹法分析结果表明,纯化的目的蛋白能与抗组氨酸标签的抗体及猪伪狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应,证实表达的蛋白具有较好的反应原性。本研究为后期制备猪伪狂犬病血清检测ELISA试剂盒奠定了基础。