基于Hippo/AMPK/AKT信号通路探究十二味疏肝利胆颗粒防治胆固醇结石的机制

目的 探究十二味疏肝利胆颗粒（Twelve-Flavor Shugan Lidan Granule，TSLG）降低胆固醇累积预防结石生成的分子机制。方法 基于药理学数据分析获取TSLG的活性成分与靶点；从Genebass数据库获取与胆囊结石疾病相关的基因，通过Cytoscape软件构建TSLG调控网络并进行核心基因鉴定；采用GO与KEGG通路富集分析对TSLG调控网络中的核心基因及肝组织转录组差异基因进行生物功能与通路注释；利用分子对接方法模拟关键生物标志物与TSLG核心成分的对接模式。采用油酸构建胆固醇累积的细胞模型，应用Western blot法、免疫荧光法检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated AMP-activated protein kinase，p-AMPK）、肝脏X受体α（liver X receptors α，LXRα）、ATP结合盒转运蛋白（ATP-binding cassette sub-family G member，ABCG）5、ABCG8、胆固醇调节元件结合蛋白2（sterol regulatory element-binding protein 2，SREBP2）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B，p-AKT）、磷酸化叉头盒蛋白O1a（phosphorylated forkhead box O1 a，p-FOXO1A）的表达水平；Seahorse细胞能量代谢仪检测细胞线粒体耗氧率和细胞外酸化率；RT-qPCR检测三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle，TAC）关键酶的mRNA表达水平。结果 网络药理学分析获得了41个TSLG调控疾病的相关靶点。分子生物学实验结果表明，TSLG抑制p-AMPK、LXRα、ABCG5、ABCG8、SREBP2的表达，增强p-AKT、p-FOXO1A的表达，TSLG抑制糖酵解并增强氧化磷酸化，TSLG抑制TAC循环酶活性，改善肝脏糖脂代谢，从而预防胆固醇结石的生成。结论 TSLG中主要成分可能通过靶向AMPK、AKT及Hippo信号通路调节肝脏代谢，以达到降低胆固醇累积、预防结石生成的作用。

Mechanism of Twelve-Flavor Shugan Lidan Granule in Prevention and Treatment of Cholesterol Stones: A Study Based on the Hippo/AMP-activated Protein Kinase/Protein Kinase B Signaling Pathway