兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompH2基因的克隆与原核表达 |
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作者姓名: | 王开 马红霞 高云航 胡桂学 裴志花 |
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作者单位: | 吉林农业大学动物科学技术学院 |
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基金项目: | 吉林省科技厅青年基金项目(201201099);吉林省教育厅项目(吉教科合字[2012]第55号);吉林省科技发展计划项目(20100230,20111820,20120229);吉林农业大学青年启动基金项目(201241);国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-44-E-6);国家自然科学基金资助项目(31272611) |
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摘 要: | 为克隆和表达兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompH2基因,并对其表达产物的反应原性进行研究,用设计的1对特异性引物对兔多杀性巴氏杆菌CVCC500株总DNA进行ompH2基因的PCR扩增。将PCR片段克隆至pMD18-T载体中,进行测序。随后,将该基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,将重组表达质粒pET30a(+)-ompH2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导。测序分析证明,得到了1条大小为1 052bp的基因片段,与国内外报道的兔多杀性巴氏杆菌ompH2基因的核苷酸序列相似性达99%以上。重组表达质粒的酶切鉴定、PCR扩增和测序分析表明,重组表达载体构建成功。SDS-PAGE检测结果证实,该基因可以在大肠杆菌中表达,表达产物为分子质量约47ku的融合蛋白。Western-blot分析表明,表达的重组蛋白ompH2具有反应原性。为研究兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompH2的免疫学活性奠定了基础。
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关 键 词: | 兔多杀性巴氏杆菌 ompH2基因 克隆 原核表达 |
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