| H9N2亚型禽流感病毒M1基因的克隆及其原核表达 |
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| 作者姓名： | 石少华 杨文涛 胡静涛 王 倩 黄海斌 许云飞 赵 亮 石春卫 王春凤 杨桂连 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心;吉林农业大学动物科学技术学院吉林省动物微生态制剂工程研究中心; |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目(2013AA102806,2011AA10A215);国家自然科学基金项目(31272541,31272552,81170358);教育部新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-10-0175);吉林省科技发展计划项目(20111816,20080104);吉林省世行贷款农产品质量安全项目(2011-Y07) |
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| 摘 要： | 为克隆H9N2亚型禽流感病毒M1基因并研究其原核表达产物的反应原性,从H9N2亚型禽流感病毒中提取病毒基因组RNA,采用RT-PCR方法克隆了M1全长基因。把M1基因克隆至pMD18-T载体中之后进行测序。M1基因亚克隆至pET-28a(+)表达载体中,构建重组表达质粒pET-28a-M1。该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,对表达产物进行纯化和鉴定。测序分析结果表明,本研究克隆的M1基因与数株甲型流感病毒的M1基因的核苷酸同源性为89.7%~99.1%。SDS-PAGE分析表明,构建的重组蛋白以可溶性形式存在。Western-blot鉴定结果表明,它具有良好的反应原性。M1的成功表达为进一步研制新型流感疫苗奠定了基础。
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| 关 键 词： | 禽流感病毒 M基因 克隆 原核表达 |
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