| 猪胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖基因的原核表达及其产物的细胞毒性 |
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| 引用本文： | 刘丽娜,何启盖,陈焕春,刘正飞,贝为成. 猪胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖基因的原核表达及其产物的细胞毒性[J]. 中国兽医科学, 2005, 35(10): 761-765 |
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| 作者姓名： | 刘丽娜 何启盖 陈焕春 刘正飞 贝为成 |
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| 作者单位： | 华中农业大学,动物医学院,湖北,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30200011)，湖北省科技攻关项目(2001AA201B02) |
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| 摘 要： | 参考GenBank中猪胸膜肺炎放线杆菌(App)血清2型荚膜多糖基因的序列分别设计了3对特异性引物,通过PCR分别扩增了CpsA、CpsB、CpsC 3个基因,获得长约1 137、429、1 146 bp的片段,将其分别克隆到pMD 18-T中,经酶切鉴定和序列分析获得了阳性克隆子;再将CpsA、CpsB、CpsC分别插入原核表达载体pGEX-KG后,转化BL21,在IPTG诱导下获得高效表达,经Western-blotting检测证实,表达产物CpsC有生物学活性,CpsA、CpsB无活性;将3种表达产物等量混合,做10倍递进稀释后,与分离出的猪嗜中性粒细胞作用,37℃5、0 mL/L CO2培养箱中温育4 h后加入底物液,测定D492 nm值。结果表明,App荚膜多糖对猪嗜中性粒细胞无毒性作用。
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| 关 键 词： | 猪胸膜肺炎放线杆菌 荚膜多糖基因 克隆 表达 细胞毒性试验 |
| 文章编号： | 1000-6419(2005)10-0761-05 |
| 修稿时间： | 2005-04-14 |
Prokaryotic expression of capsular polysaccharide genes of Actinobacillus pleuropneumoniae and cytotoxicity assay of expressed products to porcine neutrophil |
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| LIU Li-na,HE Qi-gai,CHEN Huan-chun,LIU Zheng-fei,BEI Wei-cheng. Prokaryotic expression of capsular polysaccharide genes of Actinobacillus pleuropneumoniae and cytotoxicity assay of expressed products to porcine neutrophil[J]. Chinese Veterinary Science, 2005, 35(10): 761-765 |
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| Authors: | LIU Li-na HE Qi-gai CHEN Huan-chun LIU Zheng-fei BEI Wei-cheng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Actinobacillus pleuropneumoniae capsular polysaccharide gene cloning expression (cytotoxicity) assay |
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