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| 靶向脑心肌炎病毒VP1基因的shRNA对脑心肌炎病毒复制的抑制作用 | |
| 作者姓名： | 冯若飞 李向茸 张海霞 张 蕾 马忠仁 王永录 |
| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室; |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31160033);教育部“长江学者和创新团队发展计划”项目(IRT13091);中央高校基本科研业务费专项资金项目(ZYZ2012087) |
| 摘 要： | 选择脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因,探讨了shRNA对EMCV复制的影响。设计合成4对编码siRNA的VP1基因的DNA序列,分别构建pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR干扰载体X109-1、X109-2、X109-3和X109-4,脂质体介导转染至BHK21细胞,接种EMCV。病毒TCID50和实时荧光定量PCR结果表明,4种重组EMCV VP1shRNA对EMCV的复制均有抑制作用,其中X109-2的抑制作用最显著。X109-2转染BHK21细胞后分别接种EMCV、口蹄疫病毒(FMDV)、乙型脑炎病毒(JEV),EMCV的lgTCID50为3.5,FMDV和JEV的lgTCID50均在7.0以上,说明重组shRNA质粒对EMCV复制的抑制具有明确的特异性和干扰的靶向性。X109-2和pEGFP-VP1真核表达载体共转染CHO-K1细胞后,RT-PCR和Western-blot检测结果表明,VP1shRNA可抑制pEGFP-VP1在细胞中的蛋白表达,进一步证明了干扰载体的靶向性。上述结果为进一步研究EMCV的感染和复制机制奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 脑心肌炎病毒 RNA干扰 shRNA VP基因 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |