美洲型与欧洲型PRRSV多重TaqMan荧光定量RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 |
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引用本文: | 官家明,施开创,李凤梅,张步娴,陈汉忠,邹联斌,李 军.美洲型与欧洲型PRRSV多重TaqMan荧光定量RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用[J].中国兽医科学,2014(4):412-418. |
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作者姓名: | 官家明 施开创 李凤梅 张步娴 陈汉忠 邹联斌 李 军 |
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作者单位: | 广西大学动物科学技术学院;广西动物疫病预防控制中心; |
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基金项目: | 广西自然科学基金项目(桂科青0832057) |
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摘 要: | 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型经典毒株、高致病性变异毒株以及欧洲型毒株基因组的序列差异,设计2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株以及欧洲型毒株的多重荧光定量RT-PCR方法。该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.999以上;特异性强,只有PRRSV出现阳性反应,而与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应;敏感性高,经典毒株、变异毒株、欧洲型毒株的检出下限分别为1.13、1.37、1.39copies/μL,均比普通RT-PCR敏感100倍;重复性好,组内及组间变异系数均小于1.5%。应用所建立的方法对采集的282份临床病料进行检测,结果 PRRSV阳性101份,其中95份为变异毒株、6份为经典毒株、4份为变异毒株和经典毒株混合感染,未检测到欧洲型毒株。结果表明,本研究建立的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可为PRRSV的快速鉴别诊断及流行病学调查提供有效的技术手段。
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关 键 词: | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型毒株 欧洲型毒株 多重TaqMan荧光定量RT-PCR |
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