| 羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 孔汉金,张克山,刘永杰,尚佑军,刘湘涛,吴斌.羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J].中国兽医科学,2014(7). |
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| 作者姓名： | 孔汉金 张克山 刘永杰 尚佑军 刘湘涛 吴斌 |
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| 作者单位： | 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(NSFC-31201914);家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放课题(SKLVEB2012KFKT009);国家现代肉羊产业技术体系项目(CARS-39) |
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| 摘 要： | 为制备抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体,应用PCR扩增羊口疮病毒B2L基因并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果显示,获得了4株稳定分泌抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体细胞株,其抗体亚类均为IgG1。Western-blot鉴定结果和间接荧光抗体试验表明,4株单克隆抗体均能特异性识别羊口疮病毒。经鉴定,4株单克隆抗体细胞培养上清效价为1∶640~1∶1 280,腹水效价为1∶25×211~1∶25×212。染色体计数表明,4株杂交瘤细胞均是SP2/0细胞与脾细胞的杂交产物。结果表明,抗羊口疮病毒单克隆抗体的成功制备,为进一步研究羊口疮病毒的生物学特性及羊口疮快速诊断方法的建立奠定了基础。
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| 关 键 词： | 羊口疮病毒 杂交瘤 单克隆抗体 ELISA 鉴定 |
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