抗猪流感病毒的单链抗体在真核细胞中的表达

为了研究抗猪流感病毒的单链抗体(scFv)在真核细胞内的表达情况及其生物学特性,通过PCR从前期试验获得的重组噬粒中扩增出scFv基因,将其克隆到真核表达载体p3×FLAG-CMV-7.1中,测序验证后转染A549细胞进行表达,对表达蛋白进行特性分析。结果显示,scFv基因的核苷酸序列的长度为732bp,序列排列方式为VH-Linker-VL,与数据库比对结果表明,符合小鼠抗体的重链和轻链可变区基因的结构特征。间接免疫荧光试验的结果表明,细胞内表达的绿色荧光蛋白主要分布在细胞质中。Westernblot分析显示,转染细胞的培养液上清和细胞裂解液上清中均可检测到一约32.8ku的融合蛋白,与预测结果一致。ELISA结果表明,表达的scFv具有结合猪流感病毒的活性。结果证实,抗猪流感病毒的scFv能够在细胞内正确表达,为进一步对抗猪流感的免疫治疗及免疫检测的研究提供了依据。