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| 口疮病毒VIR蛋白多克隆抗体的制备及VIR蛋白的亚细胞定位观察 | |
| 作者姓名： | 成伟伟 刘永杰 孔汉金 尚佑军 刘湘涛 刘磊 张克山 |
| 作者单位： | 甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室; |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(NSFC-31201914);中国博士后科学基金项目(2013M530683);国家现代肉羊产业技术体系项目(CARS-39) |
| 摘 要： | 为研究口疮病毒VIR蛋白的生物学特性,构建了含有VIR基因的重组表达质粒pET-VIR和含有绿色荧光蛋白融合真核重组质粒pEGFP-VIR;诱导表达和纯化VIR蛋白,并用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定抗体效价,用Western-blot鉴定抗体的反应原性。利用脂质体介导法将pEGFP-VIR质粒转染绵羊睾丸细胞,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)进行细胞核染色后激光扫描共聚焦显微镜观察VIR在细胞内的表达和亚细胞定位。结果显示,表达和纯化了含有GST标签的GSTVIR蛋白,主要以可溶性形式存在,其分子质量约27ku,制备的多克隆抗体效价达1∶218;Western-blot分析结果显示,此多克隆抗体有较好的特异性反应;VIR蛋白主要定位于细胞核内。本试验结果为VIR生物学功能的深入研究奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 口疮病毒 VIR蛋白 抗体 亚细胞定位 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |