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口蹄疫病毒表位嵌合蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达
作者姓名:任晓冰  窦小龙  魏婕  苗书魁  冉多良  马文戈
作者单位:新疆农业大学动物医学学院;新疆畜牧科学院兽医研究所;
基金项目:国家自然科学基金资助项目(31060346);农业部公益性行业(农业)科研专项(201103008)
摘    要:为了将口蹄疫病毒(FMDV)中和表位展示在病毒样颗粒(VLP)表面,以猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白为骨架,用FMDV O/Mya-98/2010毒株G-H环替换PCV2自身中和表位,构建嵌合衣壳蛋白CaO。为分泌表达CaO蛋白,在芽胞杆菌穿梭质粒pHCMC05的多克隆位点中顺次插入枯草芽胞杆菌P43启动子和中性蛋白酶B分泌信号肽(nprBsp),构建分泌型大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒p7257-P43。然后将合成的CaO基因插入p7257-P43质粒nprBsp的下游,构建分泌表达质粒p7257-P43-CaO。将该质粒转化枯草芽胞杆菌WB800,氯霉素诱导表达。上清经SDS-PAGE检测,嵌合蛋白CaO在枯草芽胞杆菌中得到表达。Western-blot证实,该蛋白具有反应原性。免疫电镜可观察到直径约15nm±2nm的VLP,表明嵌合蛋白在体外能有效组装。

关 键 词:口蹄疫病毒  表位嵌合蛋白  猪圆环病毒型  枯草芽胞杆菌
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