重组猪干扰素α的真核表达纯化及其单克隆抗体制备

为了获得猪源干扰素α(PoIFN-α)的单克隆抗体，本研究首先将PoIFN-α基因连接到pcDNA3.1真核表达载体从而构建rPoIFN-α质粒，通过真核表达系统（ExpiCHOTM）表达蛋白，并用亲和层析技术纯化后对重组蛋白进行鉴定；以重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠后进行细胞融合，用建立的间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，亚克隆后通过制备腹水得到单克隆抗体，纯化制备的抗体并鉴定。结果显示，成功构建了rPoIFN-α质粒，通过ExpiCHOTM表达系统成功表达出正确大小的可溶性蛋白，分子质量为20 ku；通过间接ELISA筛选和5次亚克隆，得到1株能稳定分泌抗IFN-α蛋白的单克隆细胞株（3c6），亚型鉴定为Ig G1亚型、Ig Gκ轻链；Western-blot结果显示，抗体可以特异识别IFN-α，抗体纯化后效价检测可达1∶256 000。上述结果表明，本试验制备的rPoIFN-α蛋白纯度高，单克隆抗体特异性强，可以在以后的研究中用于建立不同的IFN分子的检测方法，为研究猪病毒感染和免疫过程中不同细胞因子的应答情况提供便利。