基于CRISPR/Cas12a技术的非洲马瘟病毒可视化检测方法的建立

根据AHSVS7基因的保守序列，设计、合成和筛选出反转录重组聚合酶介导的恒温扩增（RT-RAA）特异性引物和CRISPR/Cas12a特异性crRNA，结合侧向流试纸建立了一种AHSV RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法，并对其性能进行了评估。结果显示，该方法与蓝舌病毒（BTV）、鹿流行性出血热病毒（EHDV）、伪狂犬病病毒（PRV）、马传染性贫血病毒（EIAV）、马动脉炎病毒（EAV）、马流感病毒（EIV）的核酸均无交叉反应；敏感性试验结果显示，本方法最低可检出2.16×101copies/μL的AHSV核酸；应用该方法及WOAH推荐的RT-q PCR方法对50份模拟样品进行平行检测，结果显示，Kappa值为0.956，表明两者具有高度一致性。综上表明，本研究建立的非洲马瘟病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化快速检测方法特异性好、敏感性高，且操作简单、无需特殊仪器，可应用于野外或口岸现场的AHSV快速筛查检测工作。