检测猪繁殖与呼吸综合征病毒及鉴别类NADC30毒株的双重荧光定量PCR方法

为建立可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）保守区和类NADC30毒株的双重TaqMan探针荧光定量PCR方法，分别针对保守的N蛋白基因和Nsp2基因设计特异性引物和探针，通过优化反应体系及反应条件对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估。结果显示，双重标准曲线的相关系数（R2）均大于0.990，具有良好的线性关系；最低检测限分别为5.27 copies/μL和3.00 copies/μL，具有较高的灵敏度；不与其他常见猪病病原发生非特异反应，且重复性良好，批内批间变异系数均小于3%。对168份临床样本的检测结果显示，PRRSV总阳性检出率为68.45%(115/168)，其中类NADC30检出率为32.14%，混合感染率为20.24%，与临床诊断结果相一致。结果表明，本方法可用于检测PRRSV和鉴别类NADC30毒株以及猪繁殖与呼吸系统综合征的流行病学调查。