牛结节性皮肤病病毒ORF006蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

为探究牛结节性皮肤病病毒（LSDV）ORF006蛋白的生物学功能，制备了ORF006基因的多克隆抗体，用PCR技术获得LSDV ORF006的基因片段克隆至pET-28a原核表达载体，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达，将纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果显示，LSDV ORF006基因全长约696 bp;pET-28a-ORF006重组质粒在大肠杆菌中于37℃经1 mmol/L的IPTG诱导12 h，成功表达约28.0 ku目的蛋白；ELISA结果显示，制备的多克隆抗体效价为1∶102 400;Western-blot结果显示，制备的多克隆抗体能特异性识别ORF006蛋白；间接免疫荧光试验表明，制备的多克隆抗体能够特异性识别LSDV感染MDBK细胞表达的ORF006蛋白。本研究为进一步探究LSDV ORF006蛋白生物学功能奠定了基础。