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抗非洲猪瘟病毒药物筛选Cell-ELISA法的建立及应用
作者姓名:钱炳旭  胡永新  郑东霞  李金明  苗雨润  戈胜强  巩明霞  韩秀琚  曾德新  汤芳  廖凯  彭宛清  吴晓东  戴建君  王志亮  薛峰
作者单位:1. 南京农业大学动物医学院;2. 中国动物卫生与流行病学中心;3. 合肥海关技术中心;4. 合肥海关技术中心,食品安全分析与检测安徽省重点实验室;5. 南京农业大学三亚研究院
基金项目:国家重点研发计划项目(2021YFD1800500,2022YFD1800500);;江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(21)20381];
摘    要:为了建立一种抗非洲猪瘟病毒(ASFV)药物高通量筛选(HTS)方法,采用ASFV感染细胞作为包被抗原,以p30单克隆抗体作为检测抗体,通过优化抗体稀释度、孵育时间等试验条件,成功建立了Cell-ELISA方法,并使用该方法对Selleck天然产物库中的1 036个化合物进行了筛选。结果显示,该Cell-ELISA法筛选得到5个具有抗ASFV活性的化合物;当5个化合物浓度为10μmol/L时,PAM细胞存活率均大于80%;进一步分析ASFV p72的转录和翻译水平,结果显示,ASFV在经化合物处理的PAM上被显著抑制,确保了Cell-ELISA筛选结果的准确性。上述结果表明,该Cell-ELISA法可作为一种HTS方法 ,用于筛选抗ASFV药物,并促进ASFV抗病毒药物的开发,对ASF疫情防控具有重要意义。

关 键 词:非洲猪瘟病毒  Cell-ELISA  抗病毒药物  高通量筛选  小分子化合物
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