猪凸隆病毒猪嵴病毒猪捷申病毒猪轮状病毒多重荧光RT-PCR方法的建立与初步应用

为建立一种同时检测猪凸隆病毒、猪嵴病毒、猪捷申病毒和猪轮状病毒的高特异性、高灵敏性的检测方法，根据这4种病毒的保守基因序列分别合成相应的特异性引物及TaqMan探针，采用One-Step法进行反应体系的优化，建立多重荧光RT-PCR方法，评估该方法的特异性、敏感性、重复性，并用于本地猪场腹泻样品中上述4种病毒的流行病学调查。结果显示：该方法特异性好，可特异性地检测上述4种病毒的单一模板及混合模板，其他对照株均无扩增信号；灵敏度高，上述4种病毒的最低检出限均为10¹ copies/μL；重复性好，批内及批间重复试验变异系数均小于3%。所建立方法还具有高通量、低污染和操作简便的优点，3 h内即完成全市猪场265份腹泻样品的检测，大大提高了检测效率。流行病学调查显示，厦门市养猪场猪嵴病毒、猪捷申病毒、猪轮状病毒和猪凸隆病毒这4种病毒均具有较高的检出率，阳性率依次为67.92%、65.28%、36.60%和27.55%。该研究将为猪腹泻病鉴别诊断及防控提供重要的技术支持。