中蜂囊状幼虫病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立与应用

通过RT-PCR方法在云南中华蜜蜂体内检测中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)，该病毒主要以AmSBV-YN(GenBank ID:KX819276.1)病毒株的形式存在。为了精确鉴定、快速检测中蜂囊状幼虫病毒，根据AmSBV-YN的CDS保守区域，设计合成特异性引物并建立相对应的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法。结果显示，该方法的标准曲线循环域值(C_t)与标准品模板浓度在2.34×10²～2.34×10⁹copies/μL间的线性关系良好，相关系数R²为0.994，斜率为-3.118。该方法与蜜蜂残翅病毒、黑蜂王台病毒、蜜蜂以色列急性麻痹病毒不发生交叉反应，表明该方法特异性强；重复性评价结果显示，批内与批间的变异系数均小于3%。所建立的荧光定量PCR方法对中华蜜蜂样品的检测结果显示，阳性率达90.0%，高于常规PCR方法的检测阳性率73.3%，说明该方法具有良好的适用性。结果表明，该方法可应用于对中蜂囊状幼虫病毒的快速检测，为中蜂囊状幼虫病的及时防控提供了有力的技术支持。