| 二重微滴式数字PCR定量检测禽呼肠孤病毒和鸡滑液囊支原体方法的建立 |
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| 作者姓名： | 谢志勤 谢芝勋 张艳芳 李小凤 范晴 谢丽基 万丽军 罗思思 李孟 张民秀 曾婷婷 黄娇玲 王盛 李丹 韦悠 任红玉 阮志华 |
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| 作者单位： | 广西壮族自治区兽医研究所 广西兽医生物技术重点实验室 农业农村部中国-东盟(广西)跨境动物疫病防控重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31660715）；;广西重点研发专项项目（桂科AB16380003）； |
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| 摘 要： | 为绝对定量检测禽呼肠孤病毒（avian reovirus,ARV）和鸡滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS），本研究建立了二重微滴式数字PCR(ddPCR)。根据已发表的ARV S1基因和MS的VlhA基因序列保守序列，分别设计了针对S1和VlhA基因的特异引物和探针，通过优化引物和探针的浓度及反应条件后，建立了二重ddPCR定量检测ARV和MS方法，并对建立方法的特异性、敏感性和重复性进行测试。结果显示，优化后最佳的引物和探针浓度分别为1.2和0.35μmol/L，最佳退火温度为55℃。特异性检测结果只检出ARV和MS，没有检出其他对照的禽病病原。敏感性检测结果显示，该方法检测ARV及MS重组质粒DNA的检出限分别为微滴数6.3和5.4 copies/μL，检测方法的检出限与单重ddPCR最低检出限相同，敏感性比荧光定量PCR方法高10倍。对3个连续稀释的ARV和MS重组质粒DNA检测结果的变异系数均小于5%，重复性好。对92份病鸡关节囊、喉拭子及肺样品进行检测，二重ddPCR方法检出12份样品呈ARV阳性，9份样品呈MS阳性，其中2份样品呈ARV和MS阳性，A...
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| 关 键 词： | 二重微滴式数字PCR 定量检测 禽呼肠孤病毒 鸡滑液囊支原体 |
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