猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立与应用

为建立一种高效准确检测猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的实时荧光定量PCR方法，以FIPV N基因为靶基因设计特异性探针和引物，构建质粒标准品。通过优化反应条件，建立real-time PCR方法，并进行临床检测。经方法优化，所建立方法的标准曲线为y=-3.137x+42.243,R²值为0.999，扩增效率E为108.0%。该方法与猫瘟病毒(FPV)、猫疱疹病毒(FHV)和猫杯状病毒(FCV)无交叉反应，特异性良好；检测最低拷贝数为9.250 copies/μL，比常规PCR方法高出100倍；组内、组间变异系数均小于5.0%，重复性好。采用建立的方法和EvaGreen real-time PCR方法对39份临床样品进行检测，结果，检出阳性样品数分别为24和22，经Kappa检验，两者高度一致。上述结果表明，本研究成功建立了高效、敏感、特异的实时荧光定量PCR方法，可用于FIPV的临床病例检测。