伪狂犬病病毒gM蛋白多抗的制备及功能探究

为获得免疫原性好的伪狂犬病病毒（PRV）gM蛋白和制备特异性的多克隆抗体，以用于gM蛋白功能的初步研究，本试验截取gM蛋白优势抗原区的碱基序列并插入pET-21a（+）载体，构建原核表达质粒pET-21a-UL10，测序正确后转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过尿素法纯化蛋白，将获得的重组蛋白免疫6周龄雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体。使用PRV-UL10真核质粒转染和PRV感染后的细胞样本进行间接免疫荧光、Western-blot和免疫沉淀试验检测其反应性和特异性。使用gM蛋白免疫C57BL/6小鼠后攻毒检测小鼠死亡率。结果显示，成功构建了表达PRV gM蛋白的重组质粒pET-21a-UL10，在37℃诱导6 h后主要以包涵体形式表达；制备的gM蛋白多克隆抗体具有良好的反应性和特异性，可特异性检测到PRV-UL10真核质粒转染和PRV感染细胞中的gM蛋白；小鼠免疫结果显示，gM蛋白诱导的免疫抗体对PRV感染的保护率低。研究表明制备的gM蛋白多克隆抗体具有较好的反应性和特异性，但其对小鼠的保护力较弱，为进一步解析gM蛋白的生物学功能奠定了必要的基础。