牛结节性皮肤病病毒LAMP快检方法的建立与应用

本研究旨在建立一种特异性检测牛结节性皮肤病病毒（LSDV）的LAMP快检方法，以用于该病临床早期诊断与监测。笔者根据LSDV的特异性基因序列，设计了数十套LAMP引物，经过筛选最终确定1套反应效率最高的引物，其位于LSDV095基因序列内。以实验室保存的PUC57-LSDV质粒作为阳性质控进行方法的优化与验证，基于不同的检测需求，分别建立了实时浊度LAMP检测方法、实时荧光LAMP检测方法及荧光可视化LAMP检测方法。优化后的3种LSDV LAMP方法灵敏度均可达20 copies/反应的靶基因，与WOAH推荐的实时荧光PCR方法（5 copies/反应）相近；特异性良好，与山羊痘病毒（GTPV）、绵羊痘病毒（SPPV）、小反刍兽疫病毒（PPRV）、赤羽病病毒（AKV）、蓝舌病病毒（BTV）及口蹄疫病毒（FMDV）均无交叉反应。其中，实时浊度法操作程序简单，实时荧光法反应快速（25 min内完成检测），荧光可视化法不依赖专用仪器及中心实验室。将所建方法应用于临床样本的检测，显示这3种方法均可特异性检测到LSDV，与实时荧光PCR方法检测结果一致性为100%，优于WOAH推荐的普通PCR...