阿卡斑病毒荧光RT-RAA快速检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速检测阿卡斑病毒(AKAV)的分子生物学检测方法，本研究通过比较分析AKAV基因组序列，在S基因保守序列区域设计重组酶介导等温扩增(RAA)引物及探针，筛选最佳引物对，然后对RAA反应温度、引物浓度以及探针浓度进行优化，建立了AKAV的荧光逆转录重组酶介导的核酸等温扩增(RT-RAA)快速检测方法。结果显示，所建立的荧光RT-RAA方法在42℃反应20 min即可快速检测出AKAV，检测下限可达6.26×10¹copies/μL，与牛病毒性腹泻病毒、蓝舌病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒等无交叉反应，并具有良好的重复性。对37份临床样品进行检测，阳性检出率为43.24%，与RT-qPCR检测结果符合率为94.59%。结果表明，建立的AKAV荧光RT-RAA快速检测方法具有快速、特异、灵敏、稳定等特点，可为AKAV的现场快速检测提供可靠方法。