禽腺病毒4型环介导等温扩增检测方法的建立

为了建立禽腺病毒4型(FAdV-4)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法，本研究以FAdV-4 hexon基因高度保守的区域设计LAMP引物，并对反应体系和反应条件进行优化，同时评价该方法的特异性、灵敏度及对临床样品的适用性。结果显示，本研究建立的LAMP方法的最佳反应条件为63℃扩增65 min；反应体系中内外引物最佳比例为8∶1,MgSO₄和dNTP浓度分别为60 mmol/L和10 mmol/L；与FAdV-10、FAdV-8b、FAdV-11、NDV、IBDV、AIV-H9、IBV、ILTV、ORT、CIAV、ALV等均无交叉反应，具有良好的特异性；本方法可检测的DNA最低浓度为7.5×10^-8ng/μL，灵敏度是传统PCR法的100倍。用本研究建立的LAMP法和PCR法对80份临床样品进行检测，结果相符率为90.5%。上述结果表明，本研究建立的FAdV-4 LAMP检测方法具有准确性高、特异性强、灵敏度高和临床应用可行性强的优点，且结果易于判定，便于现场检测，为FAdV-4提供了一种新的现场诊断方法。