| 猪生殖与呼吸综合征病毒5''''非翻译区序列的反向遗传操作 |
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| 引用本文： | 高飞,姚火春,孙志,王金勇,袁世山. 猪生殖与呼吸综合征病毒5''''非翻译区序列的反向遗传操作[J]. 中国兽医科学, 2007, 37(8): 655-660 |
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| 作者姓名： | 高飞 姚火春 孙志 王金勇 袁世山 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院,上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心,农业部动物寄生虫病重点实验室,上海,200232
2. 南京农业大学,动物医学院,江苏,南京,210095 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR获得在病毒基因组5'非编码区(5'UTR)和ORF1起始密码子之间插入Nde Ⅰ的全长克隆pTLNd4,并以此为基础将5'UTR替换为欧洲株的5'UTR,获得全长克隆pTLV8.以体外转录的RNA转染MARC-145细胞.结果显示,pTLNd4产生了细胞病变(CPE),而pTLV8未产生.通过RT-PCR和Northern blot试验,分别对这2株突变病毒的基因组RNA复制和亚基因组mRNA转录水平进行了分析,同时还对pTLNd4进行了病毒学试验.证实,它们与亲本病毒无论从分子生物学水平或病毒学水平都无明显差异;pTLV8虽未产生CPE,但在病毒传代细胞中检测到了基因组RNA,说明替换不同基因型5'UTR的突变病毒虽然丧失了复制能力和感染性,但仍然能够提供病毒RNA合成所需要的顺式调控因子.
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| 关 键 词： | 猪生殖与呼吸综合征病毒 感染性克隆 体外转录 转染 RNA印迹 |
| 文章编号： | 1673-4696(2007)08-0655-06 |
| 修稿时间： | 2007-04-06 |
Reverse genetic manipulation for 5''''UTR sequence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus |
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| GAO Fei,YAO Huo-chun,SUN Zhi,WANG Jin-yong,YUAN Shi-shan. Reverse genetic manipulation for 5''''UTR sequence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus[J]. Chinese Veterinary Science, 2007, 37(8): 655-660 |
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| Authors: | GAO Fei YAO Huo-chun SUN Zhi WANG Jin-yong YUAN Shi-shan |
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