| 鸡IFN-α和IFN-β及IFN-γ基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 |
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| 作者姓名： | 张贺楠 赖汉漳 齐岩 孔留五 张小桃 曹伟胜 廖明 |
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| 作者单位： | 华南农业大学兽医学院农业部动物重大疫病防控重点开放实验室,广东广州,510642 |
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| 摘 要： | 根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素(ChIFN-α、-β、-γ)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR Green Ⅰ染料以建立实时荧光定量PCR检测方法.将IFN-α、-β、-γ基因克隆至pGEM-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析.结果表明,鸡IFN-α、-β、-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×108copies/μL范围分别呈良好的线性关系,r2均大于0.990.熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,检测周期从RNA提取到荧光定量PCR结束只需4 h.建立的鸡IFN～α、-β、-γ基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡IFN的定量分析奠定了基础.
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| 关 键 词： | 实时荧光定量PCR 鸡 α-干扰素 β-干扰素 γ-干扰素 |
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