牛传染性鼻气管炎病毒和牛副流感病毒3型的双重荧光PCR方法的建立及应用

为建立同时检测牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和牛副流感病毒3型（BPIV3）的方法，通过对引物和探针筛选、反应体系和条件优化，成功建立了检测IBRV和BPIV3的双重荧光定量PCR方法。该方法只能特异性地检出IBRV和BPIV3，而对其他无关病原均不能检出；批内和批间变异系数均小于3%；对IBRV和BPIV3质粒标准品的检测下限分别为15.2 copies/μL和18.3 copies/μL。用建立的方法对采自四川、重庆、河北、安徽和吉林这5个地区的143份肉牛呼吸道疾病综合征(BRDC)样本以及四川省和青海省的59份牦牛BRDC样本进行检测，结果显示，肉牛样本中IBRV和BPIV3的阳性率分别为42.66%和39.86%，混感率为22.38%；牦牛样本中IBRV和BPIV3的阳性率分别为44.07%和30.51%，混感率为18.64%。上述结果表明，本研究建立的双重荧光定量PCR方法具有特异性和稳定性好、灵敏度高的特点，适用于临床上对IBRV和BPIV3的快速检测，临床样本的检测结果丰富了国内IBRV和BPIV3的流行病学资料。