牛冠状病毒牛肠病毒牛病毒性腹泻病毒三重一步法实时荧光PCR方法的建立与应用

为建立一种可以快速检测牛冠状病毒（BCoV）、牛肠病毒（BEV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的实时荧光PCR方法并应用于临床检测，根据BCoV N基因、BEV 5′-UTR基因、BVDV 5′-UTR基因设计3对特异性引物和探针，通过对引物、探针的浓度以及反应条件的优化，建立了牛冠状病毒、牛肠病毒、牛病毒性腹泻病毒三重一步法实时荧光PCR方法，并对该三重PCR方法的敏感性、重复性、特异性和临床样本检测结果进行了评价。结果显示，该方法灵敏度高，对BCoV、BEV和BVDV的最低检测限为10 copies/μL；重复性稳定，批内和批间变异系数（CV）均在2%以下；特异性强，对常见腹泻类病原无交叉反应。应用此方法检测河南省445份牛腹泻粪便样本，BCoV、BEV和BVDV的阳性率分别为6.5%(29/445)、17.5%(78/445)、12.1%(54/445)。上述结果表明，本研究建立了牛冠状病毒、牛肠病毒、牛病毒性腹泻病毒一步法三重实时荧光PCR方法，为疫病的快速检测及预防提供了有效的技术手段。