| 高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒感染猪外周血单核细胞cDNA文库的构建 |
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| 引用本文： | 肖晶,符芳,李海忠,张永欣,柴政,蔡雪辉,宋淑萍,李曦. 高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒感染猪外周血单核细胞cDNA文库的构建[J]. 中国兽医科学, 2009, 39(8) |
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| 作者姓名： | 肖晶 符芳 李海忠 张永欣 柴政 蔡雪辉 宋淑萍 李曦 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;东北农业大学,黑龙江,哈尔滨,150030
2. 中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001 |
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| 基金项目： | 黑龙江省自然科学基金重点项目 |
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| 摘 要： | 为应用CloneminerTM cDNA Library Construction Kit构建高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪的外周血单核细胞cDNA文库,以1×105TCID50PRRSV肌肉接种健康猪,攻毒后第3、5、7、9、14、21及28 d分别采集感染猪外周血,分离单核细胞,提取总RNA、mRNA,以mRNA为模板,通过引物Biotin-attB2-Oligo(dT)、SuperScript.ⅡRT合成5'末端具有attB1接头的cDNA.用柱层析方法纯化cDNA,纯化后的cDNA与pDONRTM222载体进行BP重组,于大肠杆菌DH10B转化,进行文库容量测定.结果表明,构建的高致病性PRRSV感染猪外周血单核细胞cDNA文库的库容量为1.36×107CFU,平均插入片段长度大于1 200 bp,重组率为94.3%,为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具.
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| 关 键 词： | 猪生殖与呼吸综合征病毒 外周血单核细胞 cDNA文库 |
Construction of cDNA library of peripheral blood mononuclear cells of pigs inoculated with highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus |
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| XIAO Jing,FU Fang,LI Hai-zhong,ZHANG Yong-xin,CHAI Zheng,CAI Xue-hui,SONG Shu-ping,LI Xi. Construction of cDNA library of peripheral blood mononuclear cells of pigs inoculated with highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus[J]. Chinese Veterinary Science, 2009, 39(8) |
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| Authors: | XIAO Jing FU Fang LI Hai-zhong ZHANG Yong-xin CHAI Zheng CAI Xue-hui SONG Shu-ping LI Xi |
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