| 实时荧光定量PCR检测硅藻UPA基因在溺死诊断中的研究 |
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| 引用本文： | 刘向东,刘超,徐曲毅,彭帆,胡孙林,麦柏盛,刘宏,李越,胡慧英,徐际超,张书睿,韩雅莉,谭竹钧.实时荧光定量PCR检测硅藻UPA基因在溺死诊断中的研究[J].中国法医学杂志,2018(2):124-129. |
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| 作者姓名： | 刘向东 刘超 徐曲毅 彭帆 胡孙林 麦柏盛 刘宏 李越 胡慧英 徐际超 张书睿 韩雅莉 谭竹钧 |
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| 作者单位： | 广东工业大学轻工化工学院;广州市刑事科学技术研究所公安部法医病理学重点实验室 |
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| 基金项目： | 广东省公益研究和能力建设项目(2015A02021 7001);公安部计划研究项目(2015JSYJA03);公安部科技强警基础工作专项(2017GABJC07) |
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| 摘 要： | 目的建立硅藻UPA条形码基因的实时荧光定量PCR检测方法,探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法对Gene Bank中登录的硅藻UPA基因序列进行比对获得同源序列,据其设计硅藻门通用引物。对2种人体常见共生菌(大肠杆菌、双歧杆菌)、3种浮游细菌、15种浮游藻类、32具尸体(其中生前溺水死亡28例,死后抛尸1例,陆地死亡3例)的组织样本(肺、肝、肾)及尸体发现地水样提取DNA,采用设计的引物进行特异性、灵敏度、重复性试验,分析检材中硅藻检出情况,统计硅藻阳性率,以上述组织样本的微波消解-真空抽滤-自动扫描电镜法检测结果对建立的q PCR检测方法进行比较评估,比较该方法与PCR-毛细管电泳检测法的灵敏度。结果引物UPA99仅对硅藻标准株(针杆藻、舟形藻、直链藻、小环藻、菱形藻)DNA具有扩增,扩增产物熔解曲线平稳,峰尖且窄,熔解温度为(87±1)℃。以p MD18-T重组质粒为标准品,检测区间为1.56×10~2-1.56×10-5ng/μL,建立实时q PCR方法的灵敏度为1.56×10-5ng/μL,而PCR-CE方法的灵敏度为1.56×10-3ng/μL。批间及批内变异系数均低于2%,具有较高的重复性和稳定性。对于生前溺水尸体肺、肝、肾的检出率依次为89.3%,71.4%,64.3%。结论基于硅藻UPA基因设计通用引物,建立的q PCR硅藻检验法特异性高、灵敏度高、重复性好,应用于溺死诊断具有较好的应用前景。
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| 关 键 词： | 法医病理学 溺死 硅藻检验 实时荧光定量PCR UPA |
A real-time qPCR method to identify diatom UPA gene for the drowning diagnosis |
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| Liu Xiangdong,Liu Chao,Xu Quy,Peng Fan,Hu Sunlin,Mai Baishen,Liu Hong,Li Yue,Hu Huiying,Xu Jichao,Zhang Shurui,Han Yali,Tan Zhujun.A real-time qPCR method to identify diatom UPA gene for the drowning diagnosis[J].Chinese Journal of Forensic Medicine,2018(2):124-129. |
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| Authors: | Liu Xiangdong Liu Chao Xu Quy Peng Fan Hu Sunlin Mai Baishen Liu Hong Li Yue Hu Huiying Xu Jichao Zhang Shurui Han Yali Tan Zhujun |
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| Institution: | (Faculty of Chemical Engineering and Light Industry, Guangdong University of Technology, Guangzhou 510006, China;Guangzhou Forensic Science Institute, Key Laboratory of Forensic Pathology in Ministry of Public Security, Guangzhou 510000, China) |
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| Abstract: | Liu Xiangdong;Liu Chao;Xu Quy;Peng Fan;Hu Sunlin;Mai Baishen;Liu Hong;Li Yue;Hu Huiying;Xu Jichao;Zhang Shurui;Han Yali;Tan Zhujun(Faculty of Chemical Engineering and Light Industry, Guangdong University of Technology, Guangzhou 510006, China;Guangzhou Forensic Science Institute, Key Laboratory of Forensic Pathology in Ministry of Public Security, Guangzhou 510000, China) |
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| Keywords: | forensic pathology drowning diatom test real-time quantitative PCR UPA |
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