| 牛轮状病毒VP7基因在昆虫细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 范晴,谢芝勋,刘加波,庞耀珊,邓显文,谢志勤,谢丽基,罗思思.牛轮状病毒VP7基因在昆虫细胞中的表达[J].中国兽医科学,2013(2):159-163. |
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| 作者姓名： | 范晴 谢芝勋 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 罗思思 |
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| 作者单位： | 广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家百千万人才工程人选专项(945200603);广西特聘专家专项(2011B020);广西科技攻关项目(0992033-5);广西自然科学基金项目(2011GXNSFA018096) |
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| 摘 要： | 利用PCR方法扩增出牛轮状病毒外衣壳蛋白VP7基因,经BamHⅠ+PstⅠ特异性酶切后,连接于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA中,成功构建了重组质粒pFastBacHTA-VP7。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素筛选和PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-VP7。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot分析。结果显示,成功扩增了VP7基因,大小为981bp,所表达的重组蛋白大小为40.4ku,与预期值相符,该蛋白能与牛轮状病毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。此研究结果为进一步研发牛轮状病毒ELISA检测试剂盒奠定了物质基础。
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| 关 键 词： | 牛轮状病毒 VP7蛋白 杆状病毒表达体系 昆虫细胞 |
Expression of VP7 gene of bovine rotavirus in Sf9 cells |
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| FAN Qing,XIE Zhi-xun,LIU Jia-bo,PANG Yao-shan,DENG Xian-wen,XIE Zhi-qin,XIE Li-ji,LUO Si-si.Expression of VP7 gene of bovine rotavirus in Sf9 cells[J].Veterinary Science in China,2013(2):159-163. |
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| Authors: | FAN Qing XIE Zhi-xun LIU Jia-bo PANG Yao-shan DENG Xian-wen XIE Zhi-qin XIE Li-ji LUO Si-si |
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| Institution: | (Guangxi Key Laboratory for Animal Vaccine and New Technologies,Guangxi Veterinary Institute,Nanning 530001,China) |
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