| 犬和猫狂犬病病毒抗体SPA-ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 范晓娟,曾妮,李刚. 犬和猫狂犬病病毒抗体SPA-ELISA检测方法的建立[J]. 中国兽医科学, 2010, 40(6) |
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| 作者姓名： | 范晓娟 曾妮 李刚 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京,100094 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目，国家"十一五"科技支撑计划项目，中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 |
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| 摘 要： | 采用RT-PCR方法扩增狂犬病病毒(RV)FluryLEP毒株N基因,将该片段克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,测序验证后将阳性重组质粒转化至宿主菌E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,RVN蛋白以包涵体形式表达,大小约为70ku,且该重组N蛋白具有良好的反应原性。用纯化的重组N蛋白作为诊断抗原建立了检测犬、猫RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原的最佳包被浓度为6μg/mL,血清最佳稀释度为1:200,SPA-HRP的最佳稀释度为1:2000。用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对30份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为96.67%。表明基于重组N蛋白的间接ELISA方法可用于检测犬、猫RV抗体水平。
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| 关 键 词： | 狂犬病病毒 N蛋白 原核表达 酶联免疫吸附试验 抗体 |
Development of SPA-ELISA for detection of the antibodies against rabies virus in dogs and cats |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SPA |
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