| 副猪嗜血杆菌部分体内诱导基因的筛选 |
| |
| 引用本文： | 都启晶,曹三杰,王国镔,唐彬川,张芯铨,黄小波,文心田. 副猪嗜血杆菌部分体内诱导基因的筛选[J]. 中国兽医科学, 2010, 40(7) |
| |
| 作者姓名： | 都启晶 曹三杰 王国镔 唐彬川 张芯铨 黄小波 文心田 |
| |
| 作者单位： | 四川农业大学,动物医学院动物,传染病与基因芯片实验室;四川省动物疫病与人类健康重点实验室,四川,雅安,625014 |
| |
| 基金项目： | 教育部"长江学者和创新团队发展计划"项目 |
| |
| 摘 要： | 用Sau3AⅠ酶切副猪嗜血杆菌(HPS)SC-1株基因组,回收500～2000bp的片段,并与pRSETa/b/c载体连接,构建了HPSSC-1株基因组表达文库;将攻毒后不同时间的猪血清混合,分别与体外培养的HPSSC-1和大肠杆菌BL21的全菌、超声裂解产物及热变性裂解产物进行吸附,用ELISA检测吸附效果,并用Western-blot进一步验证;再用经过吸附的混合血清对HPSSC-1基因组表达文库进行菌落原位免疫杂交筛选;对筛选出来的阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果显示,构建的副猪嗜血杆菌基因组文库库容量为1.2×104CFU;混合血清经过吸附后,D450nm由0.384下降到0.220。Western-blot结果显示,经吸附的血清与HPSSC-1株超声裂解产物无任何条带;通过原位免疫印迹筛选获得5个阳性克隆;阳性克隆测序结果经DNAMAN分析初步推测出5个可能具有生物学意义的开放阅读框,BLAST分析表明,这些序列与GenBank中的副猪嗜血杆菌相应基因的同源性在99%以上,分别涉及副猪嗜血杆菌的酪氨酸磷酸酯酶、异亮氨酰-tRNA合成酶、荚膜多糖输出蛋白及2个假定蛋白。结果表明,应用体内诱导抗原技术从副猪嗜血杆菌SC-1株基因组表达文库中成功筛选出5个阳性克隆,其中部分基因可能与毒力相关。
|
| 关 键 词： | 副猪嗜血杆菌 基因组表达文库 体内抗原诱导鉴定技术 菌落原位免疫杂交 |
Screening of the in vivo induced antigen genes during swine infection with Haemophilus parasuis |
| |
| DU Qi-jing,CAO San-jie,WANG Guo-bin,TANG Bin-chuan,ZHANG Xin-quan,HUANG Xiao-bo,WEN Xin-tian. Screening of the in vivo induced antigen genes during swine infection with Haemophilus parasuis[J]. Chinese Veterinary Science, 2010, 40(7) |
| |
| Authors: | DU Qi-jing CAO San-jie WANG Guo-bin TANG Bin-chuan ZHANG Xin-quan HUANG Xiao-bo WEN Xin-tian |
| |
| Affiliation: | DU Qi-jing,CAO San-jie,WANG Guo-bin,TANG Bin-chuan,ZHANG Xin-quan,HUANG Xiao-bo,WEN Xin-tian(Laboratory of Animal Infectious Disease and Microarray,Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province,College of Veterinary Medicine,Sichuan Agricultural University,Ya'an 625014,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Haemophilus parasuis genomic expression library in vivo induced antigen technology colony in situ immunological hybridization |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
