| 无血凝性兔出血症病毒VP60蛋白分子特性的分析及其在大肠杆菌内的高效表达 |
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| 引用本文： | 肖跃强,张文倩,吴信明,管宇,苗立中,王艳,沈志强. 无血凝性兔出血症病毒VP60蛋白分子特性的分析及其在大肠杆菌内的高效表达[J]. 中国兽医科学, 2012, 0(10): 1017-1023 |
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| 作者姓名： | 肖跃强 张文倩 吴信明 管宇 苗立中 王艳 沈志强 |
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| 作者单位： | 山东省滨州畜牧兽医研究院;山东绿都生物科技有限公司;泰山医学院 |
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| 基金项目： | 家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金课题 |
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| 摘 要： | 分离出1株在4、25、37℃条件下均不能凝集人"O"型红细胞的兔出血症病毒(RHDV),命名为SQ-1株;采用RT-PCR扩增获得病毒主要结构蛋白VP60蛋白基因,并对目的基因进行测序及分析;将目的基因定向克隆入原核表达载体pET-30a的多克隆位点,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,纯化重组蛋白,用Western-blot检测其反应原性。测序与同源性分析结果显示,该毒株属于RHDV抗原遗传变异株(RHDVa),所扩增的VP60基因的ORF为1 740bp,编码579个氨基酸残基,与世界上其他RHDV毒株的核苷酸序列的同源性为89.9%～98.0%,与已报道的无血凝特性的病毒株whn-1株及低血凝性的Rainham株的核苷酸序列的同源性分别为95.2%及90.8%。重组质粒经IPTG诱导后目的基因获得表达,重组蛋白与预期大小一致,分子质量约为60ku,主要以包涵体形式存在。Western-blot检测证实,纯化蛋白能够与RHDV阳性血清发生良好的杂交反应,说明该重组蛋白具有良好的反应原性。
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| 关 键 词： | 兔出血症病毒 无血凝性 VP60 原核表达 反应原性 |
Analysis of molecular characteristics of VP60 protein of a strain of nonhaemagglutinating RHDV and high-level expression of the VP60 protein in Escherichia coli |
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| XIAO Yue-qiang,ZHANG Wen-qian,WU Xin-ming,GUAN Yu,MIAO Li-zhong,WANG Yan,SHEN Zhi-qiang. Analysis of molecular characteristics of VP60 protein of a strain of nonhaemagglutinating RHDV and high-level expression of the VP60 protein in Escherichia coli[J]. Chinese Veterinary Science, 2012, 0(10): 1017-1023 |
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| Authors: | XIAO Yue-qiang ZHANG Wen-qian WU Xin-ming GUAN Yu MIAO Li-zhong WANG Yan SHEN Zhi-qiang |
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| Affiliation: | 1,2(1.Shandong Binzhou Animal Science &Veterinary Medicine Academy,Binzhou 256600,China; 2.Shandong Lüdu Bio-Science &Technology Co.Ltd.,Binzhou 256600,China;3.Taishan Medical University,Taian 271016,China) |
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| Abstract: | |
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