猪IFN-γ mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 |
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作者姓名: | 韦天超 田志军 周艳君 安同庆 肖燕 彭金美 姜一峰 童光志 |
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作者单位: | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;广西大学动物科学技术学院,广西南宁,530005 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001 3. 中国农业科学院上海兽医研究所,上海,200232 4. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院上海兽医研究所,上海,200232 |
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基金项目: | 国家重点基础研究发展规划(973计划) |
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摘 要: | 为建立一种检测猪γ-干扰素(IFN-γ)的荧光定量RT-PCR方法,针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A(CyPA)的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针,以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18-T-CyPA为标准品,进行实时荧光定量RT-PCR检测,并构建猪IFN一γ mRNA和CyPA的荧光定量RT-PCR标准曲线.结果表明,建立的方法在1×101~1×107copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,相关系数r2均高达0.999,扩增效率均高于99.0%;可检测至少为100 copies的阳性标准品.该方法具有快速、敏感性高、特异性强和重复性好等特点,可应用于临床样品的检测.
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关 键 词: | 猪 IFN-γ 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针 |
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