| 脑心肌炎病毒衣壳蛋白VP3真核表达载体pCMV-HA-VP3的构建及融合表达 |
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| 引用本文： | 李倩,李向茸,马瑞仙,李生军,王兴陇,冯若飞.脑心肌炎病毒衣壳蛋白VP3真核表达载体pCMV-HA-VP3的构建及融合表达[J].中国兽医科学,2019(2):226-233. |
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| 作者姓名： | 李倩 李向茸 马瑞仙 李生军 王兴陇 冯若飞 |
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| 作者单位： | 西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室;西北民族大学生命科学与工程学院;甘肃省动物细胞工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31460665);2018年中央高校基本科研业务费资金项目(31920180130);教育部"创新团队发展计划"项目(IRT_17R88) |
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| 摘 要： | 为构建脑心肌炎病毒(EMCV)衣壳蛋白VP3的真核表达载体pCMV-HA-VP3,以期实现其在HEK293、BHK21及HeLa这三种不同细胞中的表达。提取脑心肌炎病毒RNA,通过RT-PCR、酶切与连接等方法构建重组质粒pCMV-HA-VP3,将表达载体转染进HEK293、BHK21及HeLa这三种不同细胞中,利用RT-PCR进行基因表达情况检测,采用Western-blotting和IFA对融合蛋白在这三种不同细胞中的表达及定位情况进行分析。结果显示,成功构建了衣壳蛋白VP3的真核表达载体pCMV-HA-VP3,并且实现了VP3和HA标签在三种细胞中的融合表达,其在HEK293细胞中表达量最高,其次为BHK21细胞,表达量最低的是HeLa细胞。结果表明,表达的VP3蛋白具有抗原性,且在细胞膜、细胞浆和细胞核中均有分布,为深入研究衣壳蛋白VP3的功能及在EMCV感染过程中筛选与宿主细胞互作的蛋白夯实了基础。
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| 关 键 词： | 脑心肌炎病毒 VP3基因 真核表达载体 HA标签 |
Construction of eukaryotic expression vector pCMV-HA-VP3 with encephalomyocarditis virus capsid protein VP3 and its fusion expression in different cell lines |
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| LI Qian,LI Xiang-rong,MA Rui-xian,LI Sheng-jun,WANG Xing-long,FENG Ruo-fei.Construction of eukaryotic expression vector pCMV-HA-VP3 with encephalomyocarditis virus capsid protein VP3 and its fusion expression in different cell lines[J].Veterinary Science in China,2019(2):226-233. |
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| Authors: | LI Qian LI Xiang-rong MA Rui-xian LI Sheng-jun WANG Xing-long FENG Ruo-fei |
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| Institution: | (The Key Bio-engineering and Technology Laboratory of SEA C,Northwest Minzu University,Lanzhou 730030,China;Animal Cell Engineering&Technology Research Center of Gansu,Lanzhou 730030,China;College of Life Science and Engineering,Northwest Minzu University,Lanzhou 730030,China) |
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| Abstract: | LI Qian;LI Xiang-rong;MA Rui-xian;LI Sheng-jun;WANG Xing-long;FENG Ruo-fei(The Key Bio-engineering and Technology Laboratory of SEA C,Northwest Minzu University,Lanzhou 730030,China;Animal Cell Engineering&Technology Research Center of Gansu,Lanzhou 730030,China;College of Life Science and Engineering,Northwest Minzu University,Lanzhou 730030,China) |
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| Keywords: | encephalomyocarditis virus (EMCV) VP3 gene eukaryotic expression vector HA tag |
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