| 基于thyA基因的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统的构建与应用 |
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| 引用本文： | 吉玉辉,孙怀昌,张鑫宇,夏晓莉,夏兵. 基于thyA基因的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统的构建与应用[J]. 中国兽医科学, 2008, 38(11) |
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| 作者姓名： | 吉玉辉 孙怀昌 张鑫宇 夏晓莉 夏兵 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009 |
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| 基金项目： | 江苏省科技攻关项目，上海市科技兴农科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 将大肠杆菌DH5α在含胸腺嘧啶核苷和三甲氧苄二氨嘧啶的琼脂平板上培养,获得了遗传稳定的ThyA-大肠杆菌DH5α21株。用PCR扩增野生菌和ThyA-大肠杆菌的thyA基因,将测定的序列与野生型thyA基因相比,6号突变株的thyA基因第92位碱基发生G→A转换,导致第31位甘氨酸被天冬氨酸替换,4、7和13号突变株的thyA基因从第73位连续缺失6个碱基,导致第25位甘氨酸和第26位苏氨酸缺失。经PCR扩增的包括启动子在内的鼠伤寒沙门菌thyA基因与野生型大肠杆菌DH5αthyA基因的同源性为86%。以鼠伤寒沙门菌thyA基因为选择标记,构建了含人溶菌酶基因的真核表达载体pDTALYZ,以ThyA-大肠杆菌为受体菌,构建了染色体-质粒平衡致死系统。在相同条件下,pDTALYZ转化ThyA-大肠杆菌的效率高于以卡那霉素抗性基因为选择标记的pcDNAKLYZ转化野生大肠杆菌的效率;在发酵培养过程中,两种重组菌的生长速率相似,质粒丢失率分别为25%和10%,湿菌重分别为57.68 g/L和51.00g/L,重组质粒产量分别为134.9 mg/L和135.0 mg/L。
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| 关 键 词： | ThyA-大肠杆菌 染色体-质粒平衡致死系统 构建 应用 |
Construction and application of Escherichia coli chromosome-plasmid lethal-balanced system based on thyA gene |
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| JI Yu-hui,SUN Huai-chang,ZHANG Xin-yu,XIA Xiao-li,XIA Bing. Construction and application of Escherichia coli chromosome-plasmid lethal-balanced system based on thyA gene[J]. Chinese Veterinary Science, 2008, 38(11) |
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| Authors: | JI Yu-hui SUN Huai-chang ZHANG Xin-yu XIA Xiao-li XIA Bing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ThyA-Escherichia coli chromosome-plasmid lethal-balanced system construction application |
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