| 副猪嗜血杆菌Neu基因的克隆表达及表达产物的免疫原性 |
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| 引用本文： | 刘俊琦,余兴龙,蒋大良,朱小宁,李润成,肖利军,刘春红,罗维,葛猛.副猪嗜血杆菌Neu基因的克隆表达及表达产物的免疫原性[J].中国兽医科学,2010,40(8). |
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| 作者姓名： | 刘俊琦 余兴龙 蒋大良 朱小宁 李润成 肖利军 刘春红 罗维 葛猛 |
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| 作者单位： | 湖南农业大学,动物医学院,湖南,长沙,410128 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划项目，长沙市科技计划重大专项 |
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| 摘 要： | 为研究副猪嗜血杆菌(HPS)基因工程疫苗,以HPS5型毒株为模板,通过PCR扩增获得副猪嗜血杆菌神经氨酸酶(Neu)全基因,将其克隆至pMD18-T载体并对其进行测定和分析。结果表明,Neu全基因含一个2187bp的开放阅读框,编码一含729个氨基酸的蛋白,与Neu基因参考序列(登录号:NZ-ABKM01000006)的同源性为99.0%。以pMD-Neu基因为模板,重新设计引物,扩增得到HPSNeu蛋白的部分编码区,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建得到重组原核表达质粒pET-Neu。将pET-Neu在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,经SDS-PAGE分析,重组蛋白Neu主要以包涵体形式表达,分子质量为52ku;Western-blot分析表明,重组蛋白Neu能与阳性血清发生特异性抗原反应。将纯化重组蛋白Neu试验性注射免疫昆明小鼠,攻毒试验结果显示,氢氧化铝佐剂组的保护性较低,仅有10%;而弗氏佐剂组具有较高的保护性,保护率高达60%。
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| 关 键 词： | 副猪嗜血杆菌 神经氨酸酶 原核表达 免疫原性 |
Cloning and expression of neuraminidase gene of Haemophilus parasuis and immunogenicity of its expressed product |
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| Abstract: | |
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